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聚丙烯酰胺凝膠的變性與非變性

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聚丙烯酰胺凝膠的變性與非變性
發(fā)布時(shí)間:21-11-08 瀏覽
聚丙烯酰胺凝膠的變性與非變性
 
  聚丙烯酰胺凝膠是一種合成凝膠,由亞甲基雙丙烯酰胺以丙烯酰胺為單位交聯(lián),干燥、粉碎或加工成顆粒,通過(guò)控制交聯(lián)劑的用量可以制成各種類(lèi)型的凝膠。交聯(lián)劑越多,孔隙越小。聚丙烯酰胺凝膠的商業(yè)產(chǎn)品是Bio-Gelp,是日本tosoh的TSKGEL的pw系列,適用于蛋白質(zhì)和多糖的純化。即丙烯酰胺和少量交聯(lián)劑亞甲基雙丙烯酰胺在催化劑TEMED和氧化劑過(guò)硫酸銨作用下聚合形成凝膠。今天我們來(lái)看看PAM凝膠的兩種電泳形態(tài)。
  變性聚丙烯酰胺凝膠電泳(PAGE)是基于寡核苷酸的大小,所以全長(zhǎng)產(chǎn)物可以從不完整的短分子中分離出來(lái)。通常,在電泳過(guò)程中,每個(gè)泳道中加入至少1毫克的合成寡核苷酸。電泳后,寡核苷酸帶位于紫外燈下,從凝膠上切下正確長(zhǎng)度的寡核苷酸。原理:蛋白質(zhì)或多肽與SDS結(jié)合,經(jīng)過(guò)熱變性和二硫鍵還原,形成負(fù)電荷相對(duì)一致的未折疊衍生物,其遷移速度主要由分子量決定。
  非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳(Native-PAGE),或活性電泳,用于對(duì)活性蛋白進(jìn)行聚丙烯酰胺凝膠電泳,無(wú)需添加變性劑如SDS、乙醇等,常用于酶的鑒定、同工酶分析和純化。無(wú)SDS的天然pam凝膠電泳可以在電泳過(guò)程中保持生物大分子的天然形狀和電荷。它們的分離是基于電泳遷移率和凝膠分子篩作用的差異,因此可以獲得更高的分辨率,特別是電泳分離后,蛋白質(zhì)、酶等生物大分子的生物活性仍然可以保持,這對(duì)生物大分子的鑒定具有重要意義。該方法是將兩個(gè)相同的樣品在凝膠上電泳,電泳后將凝膠切成兩半,一半用于活性染色以鑒定特定的生物大分子,另一半用于染色所有樣品以分析樣品中各種生物大分子的類(lèi)型和含量。
  以上就是有關(guān)聚丙烯酰胺凝膠的變性與非變性的相關(guān)內(nèi)容了,如果你想了解更多,歡迎關(guān)注我們。
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